Zellpassage

Adhärente Kulturen sollten passagiert werden, wenn sie sich in der log-Phase befinden, bevor sie die Konfluenz erreichen, da es sonst länger dauert, bis sie sich bei einer erneuten Aussaat erholen. Normalerweise kann man dies visuell feststellen, indem man den prozentualen Anteil der Konfluenz als die Menge des freien Raums zwischen den Zellen schätzt. In der Regel liegt der normale Bereich für die Durchführung der Zellpassage bei 70-90 %. Es ist auch wichtig, dass man die Zellen nach einem programmierten Zeitplan passagiert, um ein reproduzierbares Verhalten zu gewährleisten, das es erlaubt, den Gesundheitszustand der Zellen zu überwachen. Abweichungen von den Wachstumsmustern deuten in der Regel darauf hin, dass die Kultur ungesund ist oder eine Komponente des Kultursystems nicht richtig funktioniert. Es wird daher dringend empfohlen, ein detailliertes Zellkulturprotokoll über das Zellwachstum zu führen.

Disassoziationstechniken

Der erste Schritt bei der Subkultivierung von adhärenten Zellen besteht darin, sie von der Oberfläche des Kulturgefäßes abzulösen. Dazu eignen sich enzymatische oder mechanische Verfahren, wie in der folgenden Tabelle dargestellt.

Verfahren Dissoziationsmittel
Schütteln Schütteln des Kulturgefäßes, oder kräftiges Pipettieren
Auskratzen Zellspachtel
Enzymatische Dissoziation Trypsin, Trypsin+Kollagenase, Dispase, TrypLETM