Zellpassage
Adhärente Kulturen sollten während der log-Phase passagiert werden, bevor sie die Konfluenz erreichen, da sie ansonsten länger für die Regeneration benötigen. Du kannst die Konfluenz der Zellen durch Schätzung des freien Raums zwischen den Zellen bestimmen. Normalerweise werden Zellen bei 70-90 % Konfluenz passagiert. Es ist auch wichtig, deine Zellen nach einem Zeitplan zu passagieren, um ihre Reproduktivität aufrechtzuerhalten, die dir hilft, ihren Gesundheitsstatus zu überwachen. Abweichungen des Wachstums können darauf hinweisen, dass deine Kultur ungesund ist, oder, dass ein Fehler in deinem Zellkultursystem vorliegt. Deshalb wird empfohlen, ein detailliertes Protokoll über das Zellwachstum zu führen.
Ablösetechniken
Der erste Schritt der Subkultivierung von adhärenten Zellen ist, sie von der Oberfläche der Zellkulturflasche zu lösen. Das geht entweder enzymatisch oder mechanisch, siehe Tabelle.
Vorgang | Hilfsmittel |
---|---|
Schütteln | Schütteln der Zellkulturflasche, oder |
kräftiges Auf- und Abpipettieren | |
Kratzen | Zellspatel |
Enzymatische Ablösung | Trypsin, |
Trypsin+Kollagenase, Dispase |