Endreparatur

Fragmentierte DNA (entweder künstlich fragmentiert oder teilweise degradiert) hat typischerweise klebrige Enden, was bedeutet, dass ein Strang länger ist als der andere (siehe Abbildung 1).

Es sind zwei DNA-Stränge zu sehen, die jeweils ein Beispiel für einen DNA-Endtyp zeigen. Der erste zeigt stumpfe Enden, der zweite klebrige Enden. Der erste DNA-Strang hat die Sequenz T, C, C, T am oberen Rückgrat und die Sequenz A, G, G, A am unteren Rückgrat. Im Beispiel des stumpfen Endes wird die DNA vertikal in zwei Teile zerschnitten. Jeder Teil hat ein Basenpaar T A und ein Basenpaar C G. Der zweite DNA-Strang hat die Sequenz G, A, A, T, T, C am oberen Rückgrat und die Sequenz C, T, T, A, A, G am unteren Rückgrat. Im Beispiel des klebrigen Endes beginnt der Schnitt zwischen G und A auf dem oberen Grundgerüst, schneidet vertikal nach unten, schneidet dann horizontal zwischen den vier Basenpaaren A T und T A und schneidet dann vertikal nach unten, um zwischen A und G auf dem unteren Rückgrat zu enden. Auf diese Weise entstehen zwei Teile. Ein Teil mit dem oberen Grundgerüst A, A, T, T und dem End-Basenpaar C ,G. Der andere Teil besteht aus dem Anfangs-Basenpaar G, C und dem unteren Rückgrat T, T, A, A.

Abbildung 1. DNA mit stumpfen Enden, bei der beide Stränge gleich lang sind, im Vergleich zu DNA mit klebrigen Enden, bei der ein Strang länger ist als der andere.

DNA mit klebrigen Enden ligiert leicht an andere DNA mit komplementären klebrigen Enden. Um zu vermeiden, dass sich DNA mit diesen klebrigen Enden mit einer anderen DNA verbindet, müssen wir sie in DNA mit stumpfen Enden umwandeln (siehe Abbildung 1). Einer der Schritte in der NGS-Probenvorbereitung besteht darin, diese klebrigen Enden zu reparieren und DNA mit stumpfen Enden zu erzeugen. Dies ist wichtig für den nächsten Schritt, den A-Überhang.

Siehe auch: Endreparatur-Enzyme