Gating

Beim Gating werden die zu sortierenden Zielzellen ausgewählt, indem die Tröpfchen mit der richtigen Ladung versehen werden, um sie nach dem Passieren der Ablenkplatten in die Sammelröhrchen zu schicken. Gates können in Abhängigkeit von den FSC/SSC-Werten oder der Fluoreszenzintensität eingestellt werden.

Die gängigste erste Gating-Strategie besteht darin, FSC und SSC zu verwenden, um lebensfähige Einzelzellen zu finden und Trümmer, tote Zellen, Klumpen oder Doubletten zu eliminieren. Normalerweise haben tote Zellen oft eine niedrigere FSC und eine höhere SSC als lebende Zellen.

Sobald die Zielzellen mithilfe von FSC und SSC identifiziert sind, können sie anhand ihrer Fluoreszenz weiter selektiert werden. Wenn es nur einen Fluoreszenzmarker gibt, wird ein univariates Histogramm angezeigt. Wenn zwei verschiedene Marker verwendet werden, werden die Diagramme normalerweise als bivariates Histogramm dargestellt (Abbildung 1). Dabei wird das Diagramm in vier Quadranten für die vier möglichen Kombinationen unterteilt: doppelt positiv, einfach positiv für jeden Fluoreszenzmarker und negativ für beide.

Abbildung 1: Bivariates Histogramm