FACS-Signalmessung

FACS-Geräte können die Menge der von den Zellen emittierten Fluoreszenz messen, nachdem die Fluorophore in den Zellen oder an den Zellen durch den Laserstrahl angeregt wurden. Außerdem wird auch das Licht gemessen, das von den Zellen gestreut wird, wenn sie den Laserstrahl passieren. Es gibt zwei verschiedene Arten der Lichtstreuung (Abbildung 1):

• Vorwärtsstreuung (FSC): Es handelt sich dabei um eine Messung des hauptsächlich gestreuten Lichts, das direkt neben der Achse des einfallenden Laserstrahls in Vorwärtsrichtung von einer Fotodiode erfasst wird. Sie liefert die Zellgröße und ist eine geeignete Methode, um Partikel, die größer als eine bestimmte Größe sind, unabhängig von ihrer Fluoreszenz zu erkennen.

• Seitwärtsstreuung (SSC): Sie ist eine Messung des hauptsächlich gebrochenen und reflektierten Lichts, das an jeder Grenzfläche innerhalb der Zelle auftritt, an der sich der Brechungsindex ändert (Abbildung 3-1). Das SSC wird von einer Sammellinse in einem Winkel von etwa 90 Grad zum Laserstrahl aufgefangen und dann von einem Strahlteiler auf den entsprechenden Detektor umgelenkt. Sie ist proportional zur Granularität der Zelle oder zur internen Komplexität.

Abbildung 1: Lichtstreuung, die von FACS-Geräten erfasst wird