First Generation Sequencing

First Generation Sequencing, auch als Sanger-Sequenzierung bekannt, bezieht sich auf die Kettenterminationsmethode, die 1977 von Fredrick Sanger und Mitarbeitern entwickelt wurde (Abbildung unten). Das DNA-Molekül wird mit modifizierten Nukleotiden (ddNTP) vervielfältigt, wobei die Addition von nur einer Base pro Zyklus erlaubt ist. Die DNA wird dann mit unterschiedlicher Länge vervielfältigt: jeder Strang ist ein Basenpaar länger als das vorherige Molekül. Diese Moleküle werden dann durch Kapillarelektrophorese getrennt. Durch den fluoreszierenden Farbstoff am Ende jedes Fragments können wir die Base (A, G, T oder C) identifizieren, indem wir das unterschiedliche Farbsignal lesen.

Kettenterminationsmethode. Die markierten DNA-Moleküle werden nach ihrer Größe getrennt. Jedes Molekül hat ein modifiziertes Nukleotid (ddNTP), das mit einem Fluoreszenzfarbstoff markiert ist. Jede unterschiedliche Fluoreszenzfarbe zeigt eine bestimmte Base an: Grün (A), gelb (G), rot (T) und blau (C).

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