Fluoreszenzspektren

Fluoreszenz wird erzeugt, wenn Elektronen im Fluorophor, die in einen höheren Energiezustand gebracht wurden, in den Grundzustand zurückfallen (Abbildung 1). Die Elektronen werden durch Licht mit einer bestimmten Wellenlänge in den angeregten Zustand s₂ gebracht. Die Elektronen verlieren einen Teil dieser Energie, zum Beispiel durch Wärme, und fallen in den angeregten Zustand s₁ zurück. Fluoreszenz wird emittiert, wenn die Elektronen die verbleibende Energie verlieren, während sie von s₁ in den Grundzustand zurückfallen. Die geringere Energie des emittierten Lichts bedeutet, dass dieses Licht eine größere Wellenlänge hat.

Abbildung 1: Die Absorption von Licht einer bestimmten Wellenlänge bewirkt die Anregung von Elektronen in einem Fluorophor in den angeregten Zustand s₂. Die Elektronen verlieren einen Teil der Energie, z. B. durch Wärmeverlust, und fallen in einen energieärmeren, aber immer noch angeregten Zustand namens s₁ zurück. Wenn die Elektronen in den Grundzustand zurückfallen, wird Fluoreszenz emittiert. Die niedrigere Energie des emittierten Lichts bedeutet, dass es eine größere Wellenlänge hat.

Bei der Verwendung verschiedener Fluorophore in derselben Probe in der Fluoreszenzmikroskopie ist es wichtig, dass sich die Emissionsspektren der beiden Fluorophore nicht wesentlich überschneiden. Wenn dies der Fall ist, kann es unmöglich sein, die Signale der beiden Moleküle bei der Detektion voneinander zu unterscheiden. Dies wird als „Bleedthrough“ bezeichnet.