Gelelektrophorese Verfahren
Bei der Gelelektrophorese wird eine positive Elektrode an einem Ende der Gelschicht und eine negative Anode am anderen Ende positioniert. Die Gelschicht ist an einem Ende mit kleinen Wells versehen, in die die DNA-Fragmente und das Reagenziengemisch geladen werden (Schritt 1, Abbildung 1).
Die DNA ist negativ geladen. Wenn ein Strom durch das Gel geleitet wird, bewegt sich die DNA durch die Poren im Gel in Richtung der positiven Elektrode (Schritt 2, Abbildung 1). Kleinere DNA-Moleküle bewegen sich schneller durch das Gel als größere DNA-Moleküle, was zu einer Größentrennung führt. Dieser Unterschied in der Wanderungsgeschwindigkeit trennt die Fragmente aufgrund ihrer Größe (Schritt 3, Abbildung 1).
Nach der Elektrophorese wird die DNA visualisiert und erscheint als „Banden“ aus gruppierten DNA-Fragmenten gleicher Länge. Nur eine große Menge an DNA (Millionen von Kopien) kann mit dieser Methode sichtbar gemacht werden (Schritt 4, Abbildung 1).
Die Größen der DNA-Proben können durch den Vergleich des Abstands mit der DNA-Leiter geschätzt werden('Marker DNA' in Abb.1).
Abbildung 1: Fragmente unterschiedlicher Länge aus einer PCR-Reaktion werden auf einem Gel laufen gelassen. Die Fragmente bewegen sich mit einer Geschwindigkeit und einem Abstand relativ zu ihrer Größe: kleinere DNA-Moleküle bewegen sich im Gel schneller und weiter als längere DNA-Moleküle.