Glucose-Assay

Es gibt drei grundlegende Methoden zur Messung der Glucosekonzentration: reduzierende Methoden, Kondensationsmethoden und enzymatische Methoden.

Heute werden wir die enzymatische Methode anwenden. Das Reagenz für den Glucose-Assay enthält Glucoseoxidase, Peroxidase und o-Dianisidin. Die Oxidase reagiert mit Glucose unter Bildung von Gluconsäure und Wasserstoffperoxid.

Die Peroxidase reagiert mit dem bei der Oxidation von Glucose entstehenden Wasserstoffperoxid und dem farblosen reduzierten o-Dianisidin zu einem Produkt mit brauner Farbe(oxidiertes o-Dianisidin).

Da dieses Produkt instabil ist, wird Schwefelsäure hinzugefügt, um die Reaktion durch Denaturierung aller Enzyme zu stoppen, und es entsteht ein rosafarbenes Produkt (protoniertes oxidiertes o-Dianisidin), das stabil ist und Licht bei 540 nm absorbiert. Für jedes Glucosemolekül in der Lösung entsteht ein Molekül dieses farbigen Produkts.

Abbildung 1: Reaktionen des Glucose-Assays