Labster Logo

Fehlersuche bei der Gram-Färbung

Die Gram-Färbung ist ein heikles Verfahren, bei dem es auf jedes Detail ankommt. Fehler bei der Ausstrich-Vorbereitung oder Färbetechnik führen häufig zu falschen Ergebnissen.

Vorbereitung des Ausstrichs

  • Bakterieller Ausstrich: Wird der Ausstrich in einer zu dicken Schicht aufgetragen, erscheinen gramnegative Bakterien dunkler und können mit grampositiven verwechselt werden.
    Versuche, immer nur eine einzige Schicht des zu untersuchenden Organismus aufzutragen.

  • Fixierung: Wenn Bakterien während der Fixierung überhitzt werden, wird die Zellwand zerstört und die Bakterien sind nicht in der Lage, Kristallviolett zu binden.
    Alle Bakterien erscheinen dann als gramnegativ.

  • Abgelaufene Kulturausstriche: Wenn die Kulturausstriche zu alt sind, kann sich die bakterielle Zellwand bereits zersetzt haben, so dass sie die Kristallviolettfärbung nicht mehr aufnehmen kann. Alle Bakterien erscheinen dann als gramnegativ.

Färben

DIe Entfärbung führt häufig zu falschen Ergebnissen in der Gram-Färbung.

  • Unzureichende Entfärbung: Wird der Alkohol (Entfärber) weggewaschen, bevor er auf die Zellwand einwirkt, können die Kristallviolettmoleküle nicht aus der gramnegativen Zellwand entweichen.
    Infolgedessen erscheinen alle Bakterien nach der Gegenfärbung mit Safranin grampositiv (violett).

  • Übermäßige Entfärbung: Wenn Alkohol (Entfärber) zu lange auf dem Objektträger verbleibt, wird die Zellwand sowohl von grampositiven als auch von gramnegativen Bakterien zerstört.
    Die grampositiven Bakterien können Kristallviolett nicht aufnehmen, und daher erscheinen alle Bakterien nach der Gegenfärbung mit Safranin gramnegativ (rosa).
    Das erste Bild zeigt das Ergebnis der Unterfärbung. Zwei bohnenförmige Strukturen, die Bakterienzellen darstellen, sind violett gefärbt. Ein blauer Pfeil führt von jeder dieser Strukturen zu zwei Zellwandquerschnitten, einem für grampositive und einem für gramnegative Bakterien. In beiden Strukturen sind, obwohl sie sich voneinander unterscheiden, violette Kristallviolettmoleküle und orangefarbene Jodkugeln vorhanden. Das zweite Bild zeigt das Ergebnis der Überfärbung. Zwei bohnenförmige Strukturen, die Bakterienzellen darstellen, sind entfärbt. Ein blauer Pfeil führt von jeder dieser Strukturen zu zwei Querschnitten der inneren Zellmembran, einer für grampositive und einer für gramnegative Bakterien. In beiden Strukturen schweben die violetten Moleküle von Kristallviolett und die orangefarbenen Moleküle von Jod über der Membran und sind nicht im Inneren eingeschlossen.

Abbildung 1: Unzureichende Entfärbung Abbildung 2: Übermäßige Entfärbung