Manuelle Zellzählung

Um Zellen manuell zu zählen, brauchst du ein Hämozytometer. Ein Hämozytometer ist ein Objektträger, der speziell für die Zellzählung entworfen wurde. Der Objektträger besitzt in der Mitte eine Einsenkung, die Zählkammer, die mit einem Gitternetz markiert ist. Ein Tropfen der Zellkultur wird in die Zählkammer gegeben. Der Forscher kann die Zellkultur dann unter dem Mikroskop anschauen und mit Hilfe des Gitternetzes die Anzahl der Zellen in einem bestimmten Bereich zählen. Die Tiefe der Zählkammer ist bekannt, deshalb kann das Volumen der gezählten Zellen und so auch die Konzentration der Zellen berechnet werden.

Abbildung 1: Manuelles Hämozytometer mit dem Gitternetz, das bei der Zellzählung hilft.

Anwendung:

• Fokussiere das Gitternetz des Hämozytometers mit dem 10X Objektiv.
• Zähle mit Hilfe eines Handzählers die Zellen in einem der äußeren Quadrate, welches aus 16 kleineren Quadraten besteht. Zähle nur die Zellen, die sich innerhalb eines Quadrats, oder auf der rechten und unteren Linie befinden.
• Bewege den Objektträger zur nächsten Ecke mit 16 Quadraten und fahre mit der Zellzählung fort, bis alle 4 Ecken mit den jeweils 16 Quadraten ausgezählt wurden.
• Berechne den Durchschnitt von jedem der vier Sets und multipliziere ihn mit 10.000 (10⁴).
• Wenn du die Zellen verdünnt hast (mit Medium oder Trypanblau), musst du auch noch den Verdünnungsfaktor herausrechnen.
• Das Endvolumen ist die Anzahl der lebenden Zellen/mL der ursprünglichen Zellsuspension.