Molekulare Klonierung

Molekulares Klonieren bezeichnet den Einbau von DNA-Molekülen in einen Vektor und die darauffolgende Transformation eines Organismus (oft Bakterien oder Hefe). Die verschiedenen Techniken der molekularen Klonierung sind wichtig für die Biologie und die Medizin. Der Ablauf einer typischen Klonierung sieht folgendermaßen aus:

1. Isolation des gewünschten Gens (Gene of Interest)

2. Klonierung des Gens in einen Vektor

3. Transformation des Wirtsorganismus mit dem Vektorkonstrukt

4. Antibiotische Selektion der transformierten Zellen

5. Isolation des Klons mit dem selben genetischen Hintergrund

Der erfolgreiche Plasmideinbau kann durch eine DNA-Sequenzierung bestätigt werden. Es ist wichtig zu untersuchen, ob die Inserts erfolgreich in den Plasmidvektor ligiert worden sind, in der richtigen Konformation und dem richtigen Leseraster (Reading-Frame). Ein Frame-Shift kann zu einer Nonsense- oder Missense-Mutation führen, die beide zur Expression eines nicht funktionellen Proteins führen.

• Klonierungstechniken