Nukleinsäure-Isolierung
Die Nukleinsäureisolierung besteht in der Extraktion von DNA oder RNA (oder beidem) aus den Zellen. Die Quellen für die DNA sind weiße Blutkörperchen in einer Blutprobe (rote Blutkörperchen haben keinen Zellkern und enthalten daher keine DNA), Speichel, Haarfollikel, Spermienköpfe, Muskelgewebe, Knochen oder Zähne. Was die RNA betrifft, so gibt es in einer Zelle viele Arten von RNA-Molekülen. Bei der Isolierung von RNA aus einer Gewebeprobe werden alle Arten von RNA (= Gesamt-RNA) isoliert.
Es gibt verschiedene Vorgehensweisen für die Isolierung von Nukleinsäuren, aber die allgemeinen Schritte sind:
- 1) Nukleinsäureextraktion (Lyse und Isolierung)
- 2) Reinigung der Nukleinsäure
- 3) Quantifizierung und Reinheitsanalyse
Bei der Arbeit mit Nukleinsäuren ist es sehr wichtig, die Probe vor Verunreinigung und Degradation durch RNasen und DNasen zu schützen. Insbesondere RNasen kommen in der Umwelt sehr häufig vor und können die RNAs in deiner Probe abbauen. Daher wird Gewebe in der Regel in flüssigem Stickstoff bei einer Temperatur von -196 °C (Siedetemperatur von flüssigem Stickstoff) eingefroren. Bei dieser niedrigen Temperatur werden die Enzyme inaktiviert und alle biologischen Funktionen kommen zum Erliegen.
Nach der Isolierung der Nukleinsäuren kannst du Sequenzisolierungstechniken verwenden, um spezifische Sequenzen deiner DNA oder RNA zu isolieren.