Vorbereitung der PCR

Um ein PCR-Experiment durchzuführen, brauchst du:

• Primer
• Nukleotide
• DNA-Polymerase
• DNA-Template
• Besondere Vorsicht, um Kontaminationen zu vermeiden
• Einen Thermocycler

Wenn einer dieser Komponenten fehlt, wird keine Reaktion stattfinden und keine DNA synthetisiert werden.

Primer: Primer werden an eine spezifische DNA-Sequenz binden und den Start der DNA-Amplifikation markieren. Das Design der Primer ist sehr wichtig, um die Region-of-Interest erfolgreich zu amplifizieren. Sie definieren die Länge des PCR-Produkts, indem die Seiten beschränkt werden.

Nukleotide: Nukleotide werden benötigt, um die neue DNA-Sequenz herzustellen, sie sind die Bausteine der DNA.

Polymerase: Die Polymerase ist das Enzym, das die Nukleotide auf Basis der Template-Sequenz zusammensetzt. Taq-Polymerase ist die in PCR-Experimenten am häufigsten verwendete DNA-Polymerase.

DNA-Template: Ein Template wird als Basis für die DNA-Amplifikation benötigt. Führe eine DNA-Isolation durch, um DNA aus Zellen zu extrahieren.

Besondere Vorsicht vor Kontaminationen: Wenn du ein PCR-Experiment vorbereitest, musst du besonders vorsichtig sein, um potentielle Kontaminationen zu vermeiden. Die PCR ist eine sehr mächtige Technik zur Amplifikation von DNA. Das bedeutet, dass wenn du nur eine winzige Kontamination in deiner Probe hast (zum Beispiel DNA aus einer anderen Probe), wird auch diese DNA amplifiziert und konkurriert mit deinem Original-Template, sodass die Ergebnisse deines Experiments unbrauchbar werden. Um Kontaminationen zu verhindern, musst du immer Handschuhe tragen und in einer sauberen Umgebung arbeiten (zum Beispiel immer die Pipettenspitze wechseln, wenn du aus einer anderen Probe pipettierst, deine Haare zusammenbinden und nicht in der Nähe des PCR-Arbeitsplatzes husten oder niesen).