Reagenzien für die Gram-Färbung

Für die Gram-Färbung werden vier Reagenzien verwendet.

1. Kristallviolett (KV) ist die primäre Färbung und wird verwendet, um sowohl grampositive als auch gramnegative Bakterien violett zu färben.
Die KV-Moleküle sind positiv geladen und binden an negativ geladene bakterielle Zellwandstrukturen.

2. Iod (I) wirkt als Farbstoff-Fixierer (Beizmittel), der die violette Färbung sowohl in grampositiven als auch in gramnegativen Bakterien fixiert.
Die Iodmoleküle binden sich über elektrostatische Kräfte an Kristallviolettmoleküle und bilden einen großen, unlöslichen Kristallviolett-Iod-Komplex (KV-I-Komplex).

3. 95%iger Ethylalkohol (Ethanol) wird zur Entfärbung der gramnegativen Bakterien verwendet. Der Alkohol löst die äußere Membran auf und zerreißt die dünne Mureinschicht,
so dass die violetten KV-I-Komplexe aus der gramnegativen Zellwand entweichen können. Grampositive Bakterien bleiben nach der Alkoholwäsche violett,
da ihre dicke und robuste Mureinschicht dem Alkohol widersteht und die KV-I-Komplexe zurückhält.

4. Safranin wird als Gegenfärbung verwendet und färbt die gramnegativen Bakterien rosa. Wie Kristallviolett ist es ein positiv geladenes Molekül, das sich an negative bakterielle Zellwandstrukturen bindet.
Die grampositiven Bakterien sind bereits durch das dunklere Kristallviolett violett gefärbt und bleiben trotz der Zugabe des rosa Safranins violett.

Abbildung 1: Überblick über die Gram-Färbemethode