Retroviraler Vektor
Viren sind aufgrund ihrer Fähigkeit, fremde Gene effizient zu transportieren und zu übertragen, um eine stabile Genexpression zu erreichen, begehrte Gentransportmittel oder Vektoren,
Die am häufigsten verwendeten Vektoren werden aus Retroviren, dem Adenovirus, dem Herpes-Simplex-Virus (HSV) und dem Adeno-assoziierten Virus (AAV) entwickelt. Unter den Virustypen, die in der klinischen Gentherapie allgemein verwendet werden, ist das Retrovirus aufgrund seiner Effizienz das führende Übertragungssystem.
Abbildung 1: Gentransfer mit Lentiviren
Um die biologische Sicherheit des Vektors zu erhöhen, wird das Gen des retroviralen Vektors modifiziert, indem bis zu sechs für die HIV-Replikation und -Pathogenese wesentliche Gene entfernt werden. Das allgemeine Prinzip des Gentransfers mit Lentivirus-Vektoren lässt sich wie folgt beschreiben:
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Die Gene, die für das Strukturprotein (gag, pol und env) kodieren, werden aus dem Virusvektor (Plasmid) entfernt.
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Der Virusvektor trägt das interessierende/fremde Gen und psi packaging
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Der Virusvektor wird zusammen mit Verpackungsplasmiden, die die viralen Strukturgene tragen, in die 293FT-Verpackungszelllinie kotransfiziert.
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Das rekombinante Lentivirus wird in der 293FT-Zelllinie produziert, bevor es extrahiert wird.
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Das rekombinante Lentiviruspartikel wird in die Zielzellen transduziert, wo die reverse Transkription, die Integration des Fremdgens und die ektopische Expression des Fremdgens stattfinden.