Größenausschlusschromatographie

Die Größenausschlusschromatographie ist eine Form der Flüssigkeitschromatographie, bei der die Moleküle in der Probe entsprechend ihrer Größe getrennt werden.

Die stationäre Phase ist in der Regel ein Gel aus kugelförmigen porösen Kügelchen mit einer bestimmten Größenverteilung. Je nach Größe der verschiedenen Moleküle werden sie in die Poren der Kügelchen eingeschlossen oder nicht. Die in den Poren eingeschlossenen Moleküle verbleiben länger in der stationären Phase, bevor sie eluieren, während die ausgeschlossenen Moleküle schneller eluieren, da sie nicht in der Matrix zurückgehalten werden. Daher werden kleinere Moleküle später eluiert als größere (Abbildung 1).

Principle of separation molecules in size exclusion chromatography. First, a sample mixture consisting of molecules of different sizes - big red, medium green, and small blue spheres - is injected into the column filled with big grey spheres - porous packing. As time passes, molecules travel through the packed column from the top to the bottom, big red spheres coming down faster than the smaller ones. First large solutes, red spheres, are eluted. Then, medium solutes, green spheres, are eluted. Finally, small solutes, blue spheres, are eluted. Those elutions are depicted on the elution curve below the diagram. Three peaks are visible, first peak, with smallest retention time, for big spheres, second, with bigger retention time, for medium spheres, and last with biggest retention time, for smallest molecules.

Abbildung 1: Beispiel einer Größenausschlusschromatographie

Die Auflösung des Chromatogramms hängt von verschiedenen Faktoren ab.