Verbreitung

Der Begriff Verbreitung bezieht sich auf eine Methode zur gleichmäßigen Verteilung von Mikroorganismen auf der Oberfläche einer Agarplatte. Ein kleines Volumen einer mikrobiellen Kultur wird mit einem sterilen Spatel gleichmäßig auf der Agaroberfläche verbreitet.

Es gibt viele verschiedene Techniken zum Verbreiten. Bei einigen Techniken werden sterile Glaskügelchen verwendet, die über die Agaroberfläche gerollt werden können, um die Zellen zu verteilen. Häufig werden auch spezielle Werkzeuge, sogenannte Spatel, verwendet. Die Abbildung unten zeigt einen Einweg-Plastikspatel und einen wiederverwendbaren Metallspatel.

Im Folgenden wird ein Überblick über das Verbreitungsverfahren unter Verwendung eines wiederverwendbaren Glasspatels gegeben:

• Ein Glasspatel sollte mit einer Bunsenbrennerflamme sterilisiert werden. Zunächst taucht man den Glasspatel in Alkohol (70 % Ethanol), schüttelt den überschüssigen Alkohol ab und entzündet den Rückstand. Dann lässt man den Spatel abkühlen.
• Verbreite die mikrobielle Kultur gleichmäßig auf der Oberfläche der Nährbodenplatte. Der Druck sollte gleichmäßig sein, während das Glas auf der Oberfläche des Mediums verbreitet.
• Die mikrobielle Kultur muss von der Medienplatte aufgenommen werden.
• Die Platte mit der Oberseite nach unten inkubieren, um die Bildung von Wassertröpfchen (Kondensation) auf der Platte zu vermeiden.

Die Verbreitung wird verwendet, um einzelne Zellen aus stark verdünnten Kulturen zu isolieren, wie z. B. transformierte Zellen nach dem Klonieren. Nach dem Verbreiten der Zellen auf der Agarplatte bildet jede Zelle Kolonien von Klonen. Wenn die Zelllösung zu viele Zellen enthält, ist es nicht möglich, einzelne Kolonien zu isolieren. In diesem Fall sollte die Ausstrich-Methode verwendet werden, um einzelne Kolonien zu isolieren.

Es ist wichtig, eine einzige Kolonie auszuwählen, um reine genetische Klone zu isolieren. Eine Kolonie ist eine Gruppe von Zellen, die aus der gleichen Quelle stammen; Daher enthalten alle Zellen einer Kolonie die gleiche genetische Informationen.