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Schritte zur Durchführung der Gram-Färbung

  1. Trage Kristallviolett auf den Objektträger auf und warte 60 Sekunden. Wasche den Objektträger mit Wasser.

  2. Trage Jod auf den Objektträger auf und warte für 60 Sekunden. Wasche den Objektträger mit Wasser.

  3. Trage 95%igen Ethylalkohol auf den Objektträger auf und Warte 5 bis 10 Sekunden. Wasche den Objektträger mit Wasser.

  4. Trage schließlich Safranin auf den Objektträger auf und warte 45 Sekunden. Wasche den Objektträger mit Wasser.

Vier Phasen des Gram-Färbeversuchs. In der ersten Phase wird der Inhalt der Flasche mit einer violetten Substanz, Kristallviolett genannt, auf den Objektträger gegossen und dort 60 Sekunden lang belassen. Dadurch werden die kugel- und stäbchenförmigen Strukturen innerhalb des Kreises, die die mikroskopische Ansicht der Bakterien auf dem Objektträger darstellen, violett gefärbt. Im zweiten Schritt wird der Inhalt der Flasche mit einer orangefarbenen Substanz, dem Jod, auf den Objektträger geschüttet und dort 60 Sekunden lang belassen. Daraufhin bleiben die Bakterien unter dem Mikroskop violett. Im dritten Schritt wird der Inhalt der Flasche mit einer hellblauen Substanz, dem 95%igen Äthylalkohol, auf den Objektträger geschüttet und dort 5 bis 10 Sekunden belassen. Dadurch werden die unter dem Mikroskop sichtbaren stäbchenförmigen Bakterien entfärbt, während die kugelförmigen violett bleiben. In der letzten Phase wird der Inhalt der Flasche mit einer rosafarbenen Substanz, dem Safranin, auf den Objektträger geschüttet und dort 45 Sekunden lang belassen. Daraufhin werden die stäbchenförmigen Bakterien unter dem Mikroskop rosa gefärbt, während die kugelförmigen violett bleiben. Die stäbchenförmigen Bakterien werden als gram-negativ, die violetten als gram-positiv bezeichnet.

Abbildung 1: Arbeitsablauf der Gram-Färbemethode