Trypsin

Trypsin ist eine Serinprotease, die im Verdauungssystem vieler Wirbeltiere vorkommt und der Hydrolyse von Proteinen dient. Sie spaltet Peptidketten, hauptsächlich an der Kohlenstoffkette der Aminosäuren Lysin oder Arginin, außer, wenn darauf ein Prolin folgt. In der Zellkultur wird Trypsin verwendet, um die fokale Adhäsionen zu spalten, die die Zellen für die Anheftung verwenden, sowie die Cadherin-vermittelten Zell-Zell-Verbindungen, sodass wir einzelne Zellen ernten können. Der Aktionsmechanismus von Trypsin wird durch Serumproteine, Kalzium und Magnesium inhibiert; in der Anwesenheit von Kalzium sind auch die Cadherine trypsinresistent. Aus diesem Grund enthalten die meisten Trypsinlösungen auch EDTA, was als Kalzium-Chelator wirkt. Zusätzlich müssen wir unsere Zellen vor dem Ablösen mit kalziumfreiem und magnesiumfreiem PBS waschen. Es ist zudem wichtig, die Zellen maximal 2-5 Minuten mit Trypsin zu behandeln, da dieses ansonsten toxisch für die Zellen ist.

Normalerweise ist Trypsin tierischen Ursprungs und muss bei -20 °C gelagert und vor Nutzung auf 37 °C vorgewärmt werden.