Bloqueo

Después del tapizado, se usa un agente de bloqueo. Este es una proteína irrelevante que no interfiere con el experimento en sí. Su función es cubrir todos los sitios de unión de superficie sin saturar en los pocillos de la microplaca, evitando así las uniones no específicas de proteínas a la microplaca durante los siguientes pasos del ensayo. La unión no específica puede dar lugar a falsos positivos. Una solución tampón de bloqueo óptima maximiza la relación señal/ruido, y es importante que no interactúe con los anticuerpos de la molécula diana.

El agente de bloqueo puede ser una proteína o un detergente (o un caldo de cultivo). Los agentes de bloqueo que más se usan son Tween 20 (un detergente no iónico), leche desnatada en polvo, gelatina y suero fetal bovino (ASB).