Pasaje celular
El pasaje de los cultivos adherentes ha de realizarse cuando están en la fase exponencial, antes de que alcancen la confluencia; si no, tardarán más en recuperarse al replantarlos. Normalmente, se puede detectar visualmente estimando el porcentaje de confluencia como la cantidad de espacio libre entre células. Habitualmente, el rango normal para realizar el pasaje es de 70 - 90 %. También es importante que el pasaje se programe para asegurar un comportamiento reproducible que permita el control de su estado de salud. Las desviaciones en los patrones de crecimiento suelen indicar que el cultivo está dañado o que un componente del cultivo celular no funciona de forma correcta. Por ello, se recomienda mantener un registro detallado del crecimiento de las células del cultivo.
Técnicas de disgregación
El primer paso del subcultivo de células adherentes es despegarlas de la superficie del recipiente de cultivo. Puede hacerse utilizando procedimientos enzimáticos o mecánicos, como indica la siguiente tabla.
Procedimiento | Agente de disgregación |
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Agitado | Agitado o balanceado del recipiente de cultivo, o pipeteado vigoroso |
Raspado | Raspador de células |
Disgregación enzimática | Tripsina, Tripsina+colagenasa, Dispasa |