Velocidad de línea de barrido

En microscopía confocal, la velocidad de la línea de barrido se refiere a cuántas líneas de la muestra se escanean por segundo. Esto determina la resolución temporal de las imágenes; cuanto mayor sea la frecuencia, mayor será la resolución temporal, es decir, más tiempo durará la obtención.

A medida que aumenta la velocidad de las líneas de barrido, se reduce el tiempo de muestreo de los píxeles, lo que provoca una disminución de la relación señal/ruido y una reducción de la resolución de la imagen. La pérdida de intensidad de la imagen puede contrarrestarse aumentando la ganancia, pero la calidad de la imagen no puede mejorarse de este modo. Para aumentar la entrada de fotones hay que utilizar otras técnicas, como el aumento de la potencia del láser o el aumento del tamaño de la apertura; estas técnicas tienen sus desventajas y también requieren más tiempo, lo que anula el objetivo de utilizar una mayor velocidad de línea de barrido.

Cuando la velocidad de la línea de barrido es demasiado rápida, el campo de visión también se reduce. Esto se debe a que los espejos de barrido se desincronizan. Se utiliza una velocidad de barrido alta cuando se quiere obtener imágenes de especímenes vivos, porque el tiempo es más importante que la calidad de la imagen.

A velocidades más lentas, los píxeles se pueden escanear durante más tiempo y se detecta más señal, lo que da lugar a imágenes de mayor calidad. Sin embargo, si la velocidad de la línea de escaneo es demasiado baja, la muestra tiene que tolerar el barrido láser durante más tiempo y puede fotoblanquearse. Esto ocurre cuando los fluorocromos de la muestra se alteran fotoquímicamente de forma que ya no pueden emitir fluorescencia. Por lo tanto, es importante llegar a un compromiso entre la calidad de la imagen y el daño a la muestra para encontrar la velocidad óptima de la línea de barrido.