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Azul de Coomassie

El grupo de tinciones al que nos referimos de manera general como «azul de Coomassiekumasi» se usa para teñir geles de acrilamida con el fin de visualizar proteínas. Esta tinción recibe su nombre de Kumasi, una ciudad de Ghana, y se desarrolló para la industria textil en 1913, aunque no se ajustó al uso que le damos hoy hasta los años 60. Se trata de una tinción azul basada en el disulfonato trifenilmetano. El trifenilmetano es un sólido incoloro que se disuelve en disolventes orgánicos apolares, pero no en agua, lo cual permite de la tinción no desaparezca al enjuagarse. Los grupos de ácido sulfónico de la tinción tienen carga negativa, lo cual crea una tinción aniónica. Esto permite que se una de manera no específica a las proteínas, que contienen cargas tanto positivas como negativas en su estructura.

Durante este proceso, la tinción se una a las proteínas por medio de interacciones iónicas entre los grupos de ácido sulfónico y los grupos amino positivos de la proteína. Las moléculas de la tinción se unen a las proteínas para formar un complejo proteína-tinción que estabiliza la forma aniónica cargada negativamente de la tinción y produce el color azul, incluso en condiciones de acidez, cuando la mayoría de las moléculas de la solución se encuentran en su forma catiónica.

El azul de Coomassie kumasi tiene varias formas. Entre ellas, las dos más comunes son la R-250 y la G-250.

La estructura química de la tinción de kumasi. El compuesto consiste en 6 anillos fenilo unidos. La parte derecha de la imagen contiene un conjunto de cuatro anillos fenilo unidos. Dos de los anillos se unen por los carbonos 2 y 3 mediante un enlace terciario de iminio. El anillo fenilo que está más a la derecha está conjugado con un grupo sulfito. El fenilo que está más a la izquierda también está unido mediante un enlace doble a un puente de carbono por su carbono 4. Este carbono enlaza hacia la derecha con el carbono 4 de otro anillo fenilo conjugado con un amino secundario. El amino secundario está unido a un anillo fenilo conjugado con un enlace éter secundario por el carbono 4. A la izquierda del puente de carbono hay un anillo fenilo unido al puente del carbono 4. El anillo fenilo se une al carbono 3 de un anillo fenilo conjugado por medio de un enlace amino terciario. Este anillo fenilo sobresale claramente del resto del complejo y presenta un grupo ácido sulfónico. Ese grupo sulfónico es el que se ve atraído electrostáticamente hacia los grupos amino positivos y una la tinción de kumarsi a las proteínas.

Figura 1. Estructura molecular del azul de Coomassie R-250: Estructura que muestra el grupo sulfónico, que es atraído electrostáticamente por los grupos amino positivos que unen la tinción de Coomassiekumasi a las proteínas.