Tintes diferenciales comunes
Los tintes diferenciales son utilizados para observar la morfología bacteriana y para dividir células bacterianas en distintos grupos. Por lo general, los métodos de tinción diferencial necesitan múltiples tintes y muchos pasos de tinción. Cuando se emplea en la identificación de bacterias, la tinción diferencial puede combinarse con otros métodos.
Tinción de Gram
Figura 1: Diagrama de tinción de Gram: bacteria gram positiva (izquierda) y gram negativa (derecha).
El tinte de uso más extendido en microbiología es la tinción de Gram. En función de las diferencias en la estructura de la pared celular bacteriana, la tinción de Gram divide las bacterias en dos grupos principales: gram positivas y gram negativas. Las células gram positivas poseen una capa gruesa de peptidoglicano, un polímero que se origina a partir de aminoácidos y azúcares en la pared celular. El cristal violeta se une al peptidoglicano, tiñendo la célula de morado. Las células gram negativas también tienen peptidoglicano que, inicialmente, también se tiñe de morado. Dado que la capa de peptidoglicano es mucho más fina, la tinción de cristal violeta se destiñe cuando las células son expuestas a etanol. A continuación, son teñidas por la contratinción rosa, por lo general safranina o fucsina. Las células gram positivas también absorben safranina, pero debido a la tinción de color morado oscuro de la pared celular, no se puede observar el color rosa más claro. Por lo general, La tinción de Gram es el primer paso en la identificación de bacterias desconocidas. El peptidoglicano es la diana de una clase de antibióticos, conocidos como antibióticos betalactámicos. Mientras la capa de peptidoglicano es más fina en las bacterias gram negativas, estos organismos son menos susceptibles a los antibióticos betalactámicos, ya que tienen una membrana externa, una bicapa lipídica adicional que rodea la pared celular. Las bacterias gram positivas tienen una única bicapa lipídica dentro de la pared celular. Como en los demás métodos de tinción descritos aquí, la forma básica y la morfología de la bacteria también se pueden observar en muestras de Gram teñidas.
Tinciones ácido resistentes
Figura 2: Diagrama de tinción ácido resistente: bacteria no ácido resistente (izquierda) y ácido resistente (derecha).
Algunas bacterias no son claramente gram positivas o gram negativas, incluidas las micobacterias. Estas bacterias tienen ácido micólico en su pared celular. Esto hace que sean particularmente resistentes a la decoloración, incluso con ácido-alcohol. En los procedimientos de tinción ácido resistente, como en el caso de la tinción Ziehl-Neelsen, el carbol fucsina tiñe de rojo la pared celular. Las bacterias no ácido resistentes pierden el color rojo y son contrateñidas de color azul con azul de metileno. La tinción ácido resistente no se utiliza de manera tan habitual como en el caso de la tinción de Gram. Sin embargo, dado que las micobacterias engloban organismos causantes de enfermedades, es un tinte importante en el ámbito clínico. El ejemplo más común de micobacteria es la tuberculosis, causante de la tuberculosis en humanos.
Tinción de endosporas
Figura 3: Diagrama de tinción de endosporas: bacterias con esporas (izquierda) y bacterias sin esporas.
Las endosporas son estructuras latentes producidas por algunas bacterias cuando las condiciones son desfavorables. Pueden sobrevivir sin nutrientes y son muy resistentes ante temperaturas extremas, la radiación y los desinfectantes químicos. Debido a su exterior impermeable y resistente, las endosporas son difíciles de teñir. La tinción de endosporas, como la tinción Schaeffer-Fulton, emplea calor para conseguir que el tinte verde malaquita penetre las esporas. De forma similar a la tinción ácido resistente, las endosporas resisten a la decoloración con alcohol y retienen el tinte. Cualquier célula bacteriana (a veces conocidas como células vegetales, para distinguirlas de las otras esporas) son decoloradas y contrateñidas con safranina.