Ligación

La ligación es un proceso que une de manera covalente la columna vertebral de fosfato del ADN bicatenario. La lleva a cabo una enzima llamada ADN ligasa.

En general, la ligación se compone de dos pasos:

• Colisión de los extremos de ADN. Esta colisión tiene lugar de manera aleatoria y ocurre menos frecuentemente a bajas temperaturas. Las bajas temperaturas estabilizan el enlace de hidrógeno entre los nucleótidos complementarios. La ADN ligasa alcanza su actividad óptima a 25 ^o. Por norma general, a menor temperatura de incubación, mayor tiempo de incubación.

• Reacción enzimática. La ADN ligasa cataliza la unión entre el hidroxilo del extremo 3’ y el fosfato del extremo 5’.

Figura 1: El nucleótido de AMP se transfiere al fosfato del extremo 5’. A continuación, el OH del extremo 3’ ataca el enlace AMP-fosfato, formando un enlace covalente a la vez que se libera AMP.