Definición de CFF

La citometría de flujo con fluorescencia (CFF) es un tipo especializado de citometría de flujo. Se trata de un método de clasificación de una mezcla heterogénea de células, una por una, basado en la dispersión de luz y características fluorescentes específicas de cada célula. Proporciona un registro rápido, objetivo y cuantitativo de las señales fluorescentes de cada célula, además de separar físicamente células de particular interés. Por medio de la dispersión de la luz, la CFF puede detectar el tamaño y la complejidad de las células, mientras que sus características fluorescentes permiten a los investigadores analizar funciones biológicas diferentes o estudiar componentes celulares específicos.

Puesto que es una técnica de citometría de flujo, la CFF también se basa en tres sistemas principales: fluídico, óptico, y electrónico. Su funcionamiento combinado permite la clasificación de células. Puedes ver un diagrama de la técnica al completo en la figura 1.

Figura 1. Diagrama de la CFF. El fluido envolvente se mezcla con la muestra que contiene células en la cámara de flujo, creando un flujo uniforme que intercepta la trayectoria de un láser generado por la óptica de excitación en el llamado punto de interrogación. La dispersión de luz generada y la subsecuente fluorescencia es detectada por la óptica de recolección y enviada al software que controla el equipo por medio del sistema electrónico, que determina cómo utilizar las placas deflectoras para eliminar las células innecesarias y recoger las células de interés.