Regulación

La regulación es el proceso de selección, por medio de la correcta aplicación de la carga eléctrica a las gotitas, de las células diana a clasificar, enviándolas a los tubos de recogida tras pasar por las placas deflectoras. La regulación se puede hacer según los valores de FSC/SSC o la intensidad de la fluorescencia.

La estrategia más común de regulación es utilizar la FSC y la SSC para encontrar eventos celulares individuales viables y eliminar cualquier desecho, células muertas, y racimos o duplicados. Normalmente, las células muertas suelen tener una FSC menor y una SSC mayor que las células vivas.

Una vez que se han identificado las células diana usando la FSC y la SSC, pueden seleccionarse aún más según su fluorescencia. Si solo hay un marcador fluorescente, aparece un histograma de una variable, mientras que si se usan dos marcadores diferentes, suele reflejarse en un histograma de dos variables (figura 1). Esto divide la gráfica en cuatro cuadrantes para las cuatro combinaciones posibles: positivo para ambos, positivo individual para cada uno de los marcadores fluorescentes, o negativo para ambos.

Figura 1. Histograma de dos variables.