Microscopio de fluorescencia
El microscopio de fluorescencia se parece al microscopio de luz. La diferencia es que, en vez de traspasar el espécimen con el espectro completo de luz visible, el microscopio de fluorescencia solo proyecta una longitud de onda específica en la muestra. Esto se consigue con un filtro de excitación que solo permite que alcance la muestra una luz con una longitud de onda concreta o empleando láseres que solo emiten una longitud de onda determinada. La longitud de onda coincide con el espectro de absorción del fluorocromo, que entonces emite una longitud de onda más larga que se usa para crear una imagen. Es mucho mejor realizar esta observación a oscuras para detectar más claramente las señales fluorescentes y para evitar decolorar el portaobjetos, pues los tintes fluorescentes son fotosensibles.
Figura 1: Vista general esquemática de los componentes clave de un microscopio de luz: fuente de luz, filtro de excitación, espejo dicroico y filtro de emisión.
Los microscopios de fluorescencia cuentan con un carrusel de cubos de filtros. Los cubos tienen un filtro de excitación, un espejo dicroico y un filtro de emisión. La combinación de esos filtros coincide con las longitudes de onda de excitación y emisión de ciertos fluorocromos. Por eso, cada cubos de filtros se usa para un tinte concreto.
Desde la fuente de luz, la luz alcanza un filtro de excitación que solo permite que pase la luz con la longitud de onda específica que excita el fluorocromo. Esta luz llega a un espejo dicroico que la refleja hacia la muestra, donde excita el fluorocromo. La luz emitida cambia entonces a una longitud de onda más larga que es recogida por la lente del objetivo. Cuando la luz alcanza el espejo dicroico, esta luz con una longitud de onda más larga va hacia los oculares y/o la cámara. Por otra parte, la luz dispersa que tiene otras longitudes de onda se refleja en el espejo dicroico y no puede detectarse con los oculares y/o la cámara. El filtro de emisión entre el espejo dicroico y la cámara filtra todas las demás longitudes de onda (de fondo).