Electroforesis en gel
La electroforesis en gel es un método para separar macromoléculas cargadas de diferentes tamaños y estimar su longitud.
La electroforesis en gel se suele utilizar para separar fragmentos de ADN amplificados mediante PCR.
La muestra se coloca en pocillos en un extremo de un gel de agarosa. Se aplica una corriente eléctrica al gel, con el electrodo positivo colocado en el extremo opuesto a los pocillos. El ADN con carga negativa se moverá a través del gel hacia el electrodo positivo. Las moléculas de ADN más pequeñas se desplazan más rápido por el gel que las moléculas de ADN más grandes, lo que hace que se separen por tamaños. Después de la electroforesis, el ADN se observa y se muestra en forma de bandas resultantes de fragmentos de ADN de la misma longitud. Con este método, solo es posible visualizar una gran cantidad de ADN (millones de copias). En el gel, también se coloca un marcador de ADN que contiene una mezcla de fragmentos de ADN de tamaños conocidos. Los tamaños de las muestras de ADN pueden estimarse al comparar la distancia con el marcador de ADN (Figura 1).
Figura 1: Fragmentos de diferentes longitudes de una reacción PCR se desplazan por un gel. Los fragmentos se moverán a una velocidad y distancia relativas a su tamaño: las moléculas de ADN más pequeñas se moverán por el gel más rápido y más lejos que las moléculas de ADN más largas.
Al mezclar el producto de PCR con la solución tampón de carga, podemos ver cuánto ha viajado el producto de PCR durante la electroforesis en gel. La solución tampón de carga también es útil para hacer que la muestra pese más, de modo que se hunda al fondo del gel.
La solución tampón de carga tiene muchas composiciones diferentes, aunque normalmente contiene las siguientes sustancias químicas:
- Reactivo colorante, como xileno cianol, rojo de cresol, azul bromofenol o naranja G.
Esto le dará color a la muestra y te ayudará a visualizar la posición de la muestra en el gel de agarosa.
- Reactivo de alta viscosidad, como ficol, sacarosa o glicerol.
Esto hará la muestra más pesada al aumentar la viscosidad general de la muestra.
- Agua para diluir los reactivos mencionados.