Electroforesis en gel
La electroforesis en gel es un método que se usa en el laboratorio para separar fragmentos de ADN de diferentes tamaños. Estos tamaños se pueden estimar usando como referencia un marcador de ADN.
El ADN, al igual que el producto PCR, se carga en pequeños pocillos en un extremo de un bloque de gel.
A continuación, se aplica una corriente eléctrica al gel (a través del electrodo positivo que está al otro extremo de los pocillos). Como el ADN tiene carga negativa, se mueve a través del gel hacia el electrodo positivo. Las moléculas más pequeñas de ADN se mueven más rápido por el gel que las moléculas de ADN más grandes, separándose así por tamaños. Después de la electroforesis, se visualiza el ADN en forma de bandas debajo de cada pocillo. Solo pueden visualizarse grandes cantidades de ADN (millones de copias). También se carga en el gel un marcador de ADN que contiene una mezcla de fragmentos de ADN de tamaños conocidos. El tamaño de las muestras de ADN puede así estimarse en comparación con el marcador de ADN (figura 1).
Figura 1: Fragmentos de diferentes tamaños de una reacción de PCR en un gel. Los fragmentos se moverán a una velocidad y una distancia correspondientes a su tamaño: las moléculas de ADN más pequeñas se moverán más rápido por el gel y llegarán más lejos que las moléculas de ADN de mayor tamaño.
Al mezclar el producto de PCR con la solución tampón de carga, podemos visualizar hasta dónde se desplaza el producto de PCR durante la electroforesis en gel. La solución tampón de carga también sirve para darle más peso a la muestra, de manera que, al pipetearla en el gel, la muestra se hundirá hasta el fondo.
La solución tampón de carga puede tener una composición muy variada, pero normalmente contiene las siguientes sustancias:
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Reactivo colorante, como xileno cianol, rojo de cresol, azul bromofenol o naranja G, para añadir color a la muestra y facilitar la visualización de la posición de la muestra en el gel de agarosa.
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Reactivo de alta viscosidad, como ficol, sacarosa o glicerol, para hacer la muestra más pesada aumentando su viscosidad global.
- Agua para diluir los reactivos mencionados