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Electroforesis en gel

La electroforesis en gel es un método utilizado en los laboratorios para separar fragmentos de ADN de diferentes tamaños y determinar su tamaño. El ADN, por ejemplo, que se obtiene por PCR, se carga en pequeños pocillos en el extremo de un gel.

A continuación, se aplica una corriente eléctrica al gel (el electrodo positivo opuesto a los pocillos). Como el ADN tiene carga negativa, se moverá a través del gel hacia el electrodo positivo. Las moléculas de ADN más pequeñas se mueven más rápido a través del gel que las moléculas de ADN más grandes, lo que provoca la separación por tamaños. Después de la electroforesis, el ADN se visualiza y aparece como bandas bajo cada pocillo. Solo se puede visualizar una gran cantidad de ADN (millones de copias). También se carga en el gel una «escalera de ADN» que contiene una mezcla de fragmentos de ADN de tamaños ya conocidos. De este modo, los tamaños de las muestras de ADN pueden determinarse comparándolos con la escalera de ADN (Figura 1).

Figura 1: Los fragmentos de diferente longitud obtenidos por PCR se pasan por un gel. Los fragmentos se moverán a una velocidad y una distancia relativas a su tamaño: las moléculas de ADN más pequeñas se moverán por el gel más rápido y llegarán más lejos que las moléculas de ADN más grandes.

Al mezclar el producto de la PCR con el tampón de carga, podemos visualizar la distancia que ha recorrido el producto de la PCR durante la electroforesis en gel. El tampón de carga también es útil para hacer que la muestra sea más pesada, de modo que cuando se pipetee en el gel, esta se hunda hasta el fondo. El tampón de carga puede tener muchas composiciones diferentes; sin embargo, normalmente contendrá lo siguiente:

  • Reactivo colorante, por ejemplo, xileno-cianol, rojo de cresol, azul de bromofenol o naranja-G. Esto añadirá color a la muestra y te ayudará a visualizar la posición de la muestra en el gel de agarosa.

  • Reactivo de alta viscosidad, por ejemplo, Ficol, sacarosa o glicerol. Esto hará que la muestra sea más pesada al aumentar su viscosidad.

  • Agua para diluir los reactivos mencionados anteriormente.

Nucleótidos Escalera de ADN

Resumen de la teoría