Ensamblaje de Gibson

El ensamblaje de Gibson es una técnica de clonación que no depende de sitios de restricción, como sí lo hacen las técnicas tradicionales de clonación. El ensamblaje de Gibson se basa en la presencia de regiones homólogas en los extremos de los fragmentos de ADN.

Las tres enzimas, exonucleasa T5, ADN polimerasa Phusion y ADN ligasa Taq, procesan partes diferentes de los extremos del ADN.

En primer lugar, la exonucleasa T5 actúa en los extremos 5’, creando voladizos complementarios monocatenarios entre las dos inserciones. Estos voladizos se hibridan y la polimerasa Phusion inserta los nucleótidos que faltan entre la secuencia de ADN bicatenario, usando el voladizo homólogo como secuencia de cebado. Una vez que comienza, la reacción de Phusion es mucho más rápida que la de la nucleasa (que es bastante lenta) y los huecos se rellenan enseguida. Como último paso, la ligasa cierra la rotura de la cadena y fusiona los dos fragmentos de ADN.

Todas estas enzimas están activas a 50 ºC. En consecuencia, se pueden unir numerosos fragmentos de ADN en un solo tubo.

El ensamblaje de Gibson se usa para construir grandes circuitos a partir de vectores de posición.

Lee más sobre [cómo preparar una reacción de Gibson.] (wiki:/gibson-assembly-preparation-es)