Columna

La columna es una parte fundamental del sistema HPLC, ya que es donde tiene lugar la separación de los analitos. La columna está llena de microesferas de sílice que pueden ser recubiertas. Es el material superficial que recubre las microesferas el que determina la polaridad. Las microesferas de sílice son polares por naturaleza, pero cuando se recubren con largas cadenas de carbono, se convierten en no polares. Debido a que las microesferas dentro de la columna son estacionarias durante el proceso, también se les denomina fase estacionaria.

En la fase inversa, la fase estacionaria presente en la columna es no polar. Por lo tanto, los analitos no polares interactuarán con la columna y permanecerán más tiempo en ella, abandonando la columna más tarde que los compuestos polares.

Figura 1: Esta imagen ilustra las microesferas densamente aglutinadas dentro de una columna, como se muestra en la primera imagen circular. Si ampliamos la imagen hasta apreciar las microesferas de manera individual, como se muestra en la segunda imagen circular, se puede ver el material que recubre la superficie de las microesferas.

Figura 2: Escala de polaridad para la fase estacionaria.