Recuento celular manual

Para contar células manualmente, necesitas un hemocitómetro. Un hemocitómetro es un portaobjetos especialmente diseñado para permitir el recuento celular. El portaobjetos tiene una cámara en el medio; el área de la cámara está marcada con una retícula. Se coloca una gota de cultivo celular en la cámara. Al observar la muestra bajo el microscopio, el investigador utiliza la retícula para contar manualmente el número de células en un área concreta. La profundidad de la cámara está predefinida. Por lo tanto, el volumen del cultivo recontado puede calcularse, y, con él, la concentración de células.

Figura 1: Hemocitómetro manual, que muestra en detalle la retícula para contar células.

Utiliza el siguiente procedimiento:

• Enfoca las líneas de la retícula del hemocitómetro con un objetivo de 10X.
• Con un contador manual, cuenta las células en un conjunto de 16 cuadrados. Al contar, utiliza un sistema por el que las células solo se cuenten cuando están clocadas dentro de la cuadrícula, o en el límite derecho o inferior.
• Mueve el hemocitómetro al siguiente grupo de 16 cuadros de las esquinas y sigue contando hasta que termines con los 4 grupos de 16 esquinas.
• Calcula la media del recuento celular de cada grupo de 16 cuadrados de las esquinas y multiplícalo por 10 000 (10⁴).
• Si diluyes las células (utilizando azul tripán o solvente), tienes que multiplicar por el factor de disolución también.
• El valor final es el número de células viables/mL en la suspensión celular original.