Hibridación de ácidos nucleicos

La hibridación de ácidos nucleicos es una técnica para analizar el ADN y el ARN de una muestra biológica. Se puede emplear en la medición de niveles de expresión o en la genotipificación. La hibridación de ácidos nucleicos se basa en la unión específica (hibridación) de las dos moléculas de ácidos nucleicos de cadena simple (ADN o ARN) complementarias. En el ADN, la adenina base siempre forma un enlace con la timina, mientras que la guanina siempre forma un enlace con la citosina. En el ARN, la timina siempre es reemplazada por uracilo para formar un par base con la adenina.

Para llevar a cabo un análisis de hibridación de ácidos nucleicos, el ADN o ARN de la muestra primero es purificado. Las secuencias de ácido nucleico de doble cadena son desnaturalizadas y fragmentadas para formar cadenas simples cortas, las cuales pueden unirse a oligonucleótidos de cadena simple con una secuencia conocida, denominada sonda. El ADN o ARN separado es lavado y la unión del ADN o ARN diana a la sonda se detecta mediante marcadores fluorescentes, radioactivos o quimioluminiscentes. En caso de ser necesario, las muestras de ADN pueden ser amplificadas mediante PCR, de manera previa al análisis (ensayo de hibridación de ADN amplificado).

Figura 1: Hibridación de ácidos nucleicos: el ADN o ARN diana de cadena simple se añade a las sondas oligonucleótidas (paso 1). El ADN o RNA diana se une a sondas complementarias (paso 2). El ADN o ARN diana separado es lavado y la unión complementaria es detectada (paso 3).