Preparación de la PCR

Para llevar a cabo un experimento de PCR necesitas:

• Cebadores
• Nucleótidos
• ADN polimerasa
• ADN molde
• Mucho cuidado con las contaminaciones
• Un termociclador

Si falta cualquiera de estos componentes, no tendrá lugar ninguna reacción y no se sintetizará el ADN.

Las mezclas maestras contienen la mayoría de los componentes de la PCR (excepto el ADN molde) en una cantidad proporcional a la de las reacciones de PCR que nos gustaría realizar. Puedes reducir el error experimental, la variabilidad y ahorrar tiempo mediante la preparación de mezclas maestras.

Suelen contener cebadores directos e inversos, nucleótidos (dNTP), enzima de polimerasa Taq y, opcionalmente, MgCl₂, agua sin nucleasas y una solución tampón de reacción.

Cebadores: los cebadores se unirán a una secuencia de ADN específica y marcarán el principio de la amplificación del ADN. El diseño de los cebadores es muy importante para amplificar satisfactoriamente la región de interés. Definen la longitud del producto de PCR, limitando los extremos de la misma.

Nucleótidos: los nucleótidos son necesarios para formar la nueva secuencia de ADN; son los bloques de construcción del ADN.

Polimerasa: la polimerasa es la enzima que ensambla los nucleótidos de acuerdo con la secuencia molde. La polimerasa Taq es la ADN polimerasa más utilizada en los experimentos de PCR.

ADN molde: se necesita un molde como base a partir de la cual ejecutar la amplificación de la nueva secuencia de ADN. Lleva a cabo el aislamiento del ADN para extraer el ADN de las células.

Especial cuidado con las contaminaciones: al preparar un experimento de PCR, hay que tener especial cuidado con las posibles contaminaciones. La PCR es una técnica muy potente de amplificación del ADN. Esto significa que, si tienes una pequeña contaminación (por ejemplo, ADN procedente de otras muestras), este ADN también puede amplificarse, compitiendo con el molde original y estropeando los resultados del experimento. Para evitar las contaminaciones, siempre tienes que utilizar guantes y trabajar en un entorno muy limpio (por ejemplo, cambia la boquilla de las pipetas cuando estés extrayendo sustancias de un recipiente diferente, recógete el pelo o no tosas o estornudes cerca de la mesa de laboratorio de la PCR).