El método de fenol-cloroformo para el aislamiento de ácidos nucleicos

Los ácidos nucleicos de las células pueden aislarse mediante el método del fenol-cloroformo. El fenol-cloroformo es una mezcla de fenol saturado de tampón y cloroformo en proporción 1:1. Los pasos del procedimiento son los siguientes:

• 1) Lisis y homogeneización en solución acuosa. Esto se hace con un tampón de lisis y agitando la muestra con un agitador vórtex.
• 2) Añadir fenol-cloroformo al lisado y mezclarlo con un agitador vórtex.

• 3) Centrifugar para separar las fases según la densidad. El fenol tiene una densidad de 1,07 g/cm³ mientras que el cloroformo tiene una densidad mayor (1,47 g/cm³), por lo que forman dos fases, la fase orgánica inferior (fenol-cloroformo) y la fase acuosa superior (véase la imagen inferior). Los ácidos nucleicos adquieren polaridad gracias a la carga negativa de la estructura principal del fosfato; por lo tanto, los ácidos nucleicos son solubles en la fase acuosa superior. Las proteínas contienen regiones hidrofóbicas que interactúan con el fenol y hacen que las proteínas se precipiten en la interfaz entre dos fases (a menudo como floculación blanca). Los lípidos también tienen una región hidrofóbica y se disolverán en la fase orgánica inferior. El pH de la mezcla determina la separación de los ácidos nucleicos. En un pH neutro, el ARN y el ADN se retienen en la fase acuosa superior, pero en un pH ácido, el ADN pasa a la fase orgánica inferior y el ARN permanece en la fase acuosa superior.

• 4)Recuperación de los ácidos nucleicos. En el último paso, los ácidos nucleicos se recuperan de la fase acuosa por precipitación con isopropanol.

Para el aislamiento de los ácidos nucleicos se utiliza el método de extracción con fenol-cloroformo.