Condiciones fisicoquímicas

Un factor importante al cultivar células in vitro es el control de las condiciones fisicoquímicas. El medio de cultivo es el componente más importante del entorno de cultivo celular porque provee los nutrientes necesarios, pero también otros componentes tales como el bicarbonato de sodio o, a veces, rojo de fenol, que ayudan a controlar las condiciones fisicoquímicas requeridas.

pH

La mayoría de las líneas celulares mamíferas crecen bien con un pH de 7,4, con muy poca variabilidad entre líneas celulares. Por tanto, para controlar el pH del entorno de los cultivos celulares, algunos medios incluyen indicadores de pH, como el rojo de fenol, que también los protegen de la degradación por luz ultravioleta.

Figura 1: Variaciones en el rojo de fenol dependiendo del pH.

CO₂

El medio de crecimiento controla el pH del cultivo y protege a las células del cultivo contra cambios en el pH. Normalmente, esta protección se obtiene incluyendo un tampón de bicarbonato. Como el pH del medio depende del delicado equilibrio entre el dióxido de carbono disuelto (CO₂) y el bicarbonato (HCO₃^-), los cambios en el CO₂ de la atmósfera pueden alterar el pH del medio. Por tanto, es necesario utilizar CO₂ exógeno, siento un 5% de CO₂ la concentración más utilizada.

Figura 2: Balance de CO₂ disuelto y HCO₃^- requerido para mantener el pH.

Temperatura

La temperatura óptima para el cultivo celular depende mucho de la temperatura corporal del huésped del que se están aislando las células. La mayoría de las líneas humanas y mamíferas se mantienen a una temperatura de entre 36 y 37 ºC para un crecimiento óptimo. Esta es una de las razones por las que se precalientan los reactivos antes de utilizarlos, para evitar el shock térmico de las células.