Preparación de muestras de proteínas para electroforesis

Una proteína está formada por uno o más polipéptidos o moléculas adicionales que se mantienen unidas mediante interacciones moleculares como los enlaces de hidrógeno, los enlaces disulfuro, las interacciones hidrófobas y los enlaces iónicos. Estas interacciones moleculares crean una organización dentro de la estructura de la proteína. El nivel primario de organización es aquel en el que cada aminoácido se una al siguiente por medio de un enlace peptídico simple y se forma una cadena polipeptídica única. Después, los polipéptidos pueden interactuar entre ellos de otras maneras que dan lugar a niveles estructurales que pueden ser primarios, secundarios, terciarios o cuaternarios. Esta estructura es importante para la electroforesis porque las proteínas deben estar en su estructura primaria para poder separarse según su peso molecular. El proceso de preparación de muestras con SDS garantiza que las proteínas alcancen su estructura primaria.

Para desplegar la proteína y dejarla con su estructura primaria, antes de realizar la electroforesis, se añade a la muestra de proteína una solución tampón de carga que contiene lo siguiente:

• Dodecilsulfato sódico (SDS) para romper los enlaces y crear una carga uniformemente negativa
• Beta-mercaptoetanol para romper los enlaces disulfuro en particular
• Azul de bromofenol como indicador de la migración a través del gel
• Glicerol para aumentar el peso de la muestra
• Ácido clorhídrico (HCl) para ionizar la muestra y aumentar la movilidad electroforética

Una vez añadida la solución tampón, calentamos la muestra. Esto garantiza que el SDS se una completamente a la proteína y la recubra de carga negativa. También asegura que todos los enlaces se hayan roto y la proteína se encuentre en su estructura primaria más simple.

Figura 1. Preparación de las proteínas para la SDS-PAGE: Efectos del SDS y el beta-mercaptoetanol sobre las proteínas.