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Experimento de proteína truncada

Diagrama que muestra los pasos de una prueba de truncamiento de proteína. Primero, se muestra una hélice de ADN de doble hebra. La región de ADN de interés se somete a amplificación por PCR para asegurar un número suficiente de copias. A continuación, se produce la transcripción y traducción *in vitro*. Se muestra una hebra de ARN con un codón de inicio en el extremo 3'. Una proteína, que está representada por una cadena de puntos rojos, se ensambla durante la traducción. Luego, las proteínas se analizan mediante SDS-PAGE, un proceso que utiliza una corriente eléctrica en una matriz de gel para separar las proteínas en función de su peso molecular. Se muestra un ejemplo simple de resultados de SDS-PAGE, donde las bandas en una bandeja de gel representan las proteínas. Se muestra una banda de proteína de longitud completa cerca del pozo de carga en la parte superior de la bandeja, mientras que se muestra una banda de proteína truncada que se ha desplazado más hacia abajo en la bandeja.

Figura 1: Un diagrama esquemático que muestra los diferentes pasos de la prueba de truncamiento de proteína.

La prueba de truncamiento de proteína se compone de cuatro pasos principales (figura 1):

  1. Aislamiento de ácidos nucleicos, ya sea ADN genómico, ARN total o ARN poli-A.
  2. Amplificación de una región específica del gen de interés mediante PCR. En este paso, se agrega un codón de inicio (ATG) al extremo 5' del ADN amplificado.
  3. Transcripción y traducción in vitro del producto.
  4. Detección de la proteína traducida mediante electroforesis en gel de poliacrilamida.

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Test de proteína truncada