Condiciones de reacción de las enzimas de restricción
La mayoría de las enzimas de restricción tienen una temperatura óptima de 37 ºC y un pH óptimo de 7,2 u 8,5. Estos requisitos ambientales físicos deben cumplirse para asegurar que la enzima alcanza su máxima actividad. Las temperaturas de incubación afectan enormemente a la actividad de las enzimas de restricción, pues estas pueden desnaturalizarse si se salen de estos parámetros de condiciones físicas. Las enzimas trabajan de manera muy específica; por lo tanto, no funcionarán adecuadamente si su estructura se deteriora. Como cada enzima de restricción se aísla de bacterias diferentes y tiene distintas condiciones óptimas de reaccióna, necesitan soluciones tampón específicas para cada reacción de restricción.
| Enzima | Secuencia | Tampón1 | Tampón2 | Tampón3 | Temp. Incu. |
|---|---|---|---|---|---|
| EcoRI | G'AATTC | 25 | 100* | 50 | 37 °C |
| KpnI | GGTAC'C | 100 | 75 | 10 | 37 °C |
| PstI | CTGCA'G | 75 | 75 | 100 | 37 °C |
| SpeI | A'CTAGT | 75 | 100 | 25 | 37 °C |
| XbaI | T'CTAGA | 10 | 100 | 75 | 37 °C |
| XhoI | C'TCGAG | 75 | 100 | 100 | 37 °C |
Tabla 1: Actividades enzimáticas. El número de cada solución tampón marca la actividad de la enzima correspondiente. Si hay un *, las enzimas pueden mostrar un pico de actividad en esa solución tampón.