Clonación por enzimas de restricción

La clonación molecular basada en enzimas de restricción es el método «clásico» de clonación y sigue siendo una de las técnicas más populares. En principio, el ensamblado de plásmidos se compone de los siguientes pasos:

• Digestión con enzimas de restricción: El vector plásmido cerrado circular y el fragmento del gen de interés se adhieren a una o más enzimas de restricción.

• Ligación: Fragmentos de ADN con voladizos compatibles se ligan en un vector plásmido alineado.

Se consiguen mayores proporciones de éxito cuando se utilizan fragmentos de ADN con voladizos 5' o 3' que ensamblando fragmentos de ADN con extremos romos.

• El ensamblaje 3A es un método utilizado para ensamblar de forma eficiente dos Biobricks.