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Cromatografía de exclusión por tamaño

La cromatografía de exclusión por tamaño es un tipo de cromatografía líquida en la que las moléculas de la muestra se separan según su tamaño.

La fase estacionaria es normalmente un gel compuesto por perlas esféricas porosas con una distribución de tamaño específica. Dependiendo del tamaño de las diferentes moléculas, se incluirán o excluirán de los poros dentro de las perlas. Los incluidos en los poros permanecerán más tiempo en la fase estacionaria antes de eluir, mientras que los excluidos eluirán más rápidamente ya que no quedarán retenidos dentro de la matriz. Por lo tanto, las moléculas más pequeñas eluirán más tarde que las más grandes (figura 1).

Principio de separación de moléculas en cromatografía de exclusión por tamaño. Primero, se inyecta una mezcla de muestra que consta de moléculas de diferentes tamaños (esferas rojas grandes, verdes medianas y pequeñas esferas azules) en la columna llena de esferas grises grandes: empaquetamiento poroso. A medida que pasa el tiempo, las moléculas viajan a través de la columna empaquetada de arriba hacia abajo, y las grandes esferas rojas descienden más rápido que las más pequeñas. Se eluyen los primeros solutos grandes, esferas rojas. Luego, se eluyen los solutos medianos, esferas verdes. Finalmente, se eluyen pequeños solutos, esferas azules. Estas eluciones se representan en la curva de elución debajo del diagrama. Tres picos son visibles, el primer pico, con menor tiempo de retención, para esferas grandes, el segundo, con mayor tiempo de retención, para esferas medianas, y el último con mayor tiempo de retención, para moléculas más pequeñas.

Figura 1: Ejemplo de cromatografía de exclusión por tamaño.

La resolución del cromatograma depende de algunos factores.