Curva estándar

La eficiencia de la reacción PCR es muy importante para interpretar correctamente los resultados de la PCR cuantitativa. Depende del ensayo, del rendimiento de la mezcla maestra y de la calidad de la muestra. Se calcula en función de una curva estándar.

La curva estándar está formada por varias reacciones de PCR cuantitativa realizadas sobre una serie de disoluciones 10X de ADN. La serie de disoluciones puede estar formada por el conjunto de las muestras de ADNc con las que vas a experimentar diluidas 10 veces sucesivamente. Para crear una curva estándar, debes representar los valores de Ct obtenidos de cada disolución (ver la parte superior de la siguiente figura) y cruzarlos con el logaritmo de los factores de dilución (FD) empleados para crear la curva estándar. Por tanto, la curva estándar es la línea de regresión que pasa por estos puntos (parte inferior izquierda de la siguiente figura). La pendiente de la línea de regresión se relaciona con la eficiencia de la amplificación mediante la fórmula detallada en la siguiente figura. Por lo general, se considera que una eficiencia de entre el 80 % y el 110 % es aceptable. Si es del 100 %, significa que la cantidad de producto de la reacción de PCR se está duplicando con cada ciclo. También puedes usar la línea de regresión para determinar la concentración de muestras desconocidas a partir de sus valores Ct.