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Pasos para realizar la tinción de Gram

  1. Aplicar violeta de cristal en el portaobjetos y mantenerlo durante 60 segundos. Lavar el portaobjetos con agua.

  2. Aplicar yodo sobre el portaobjetos y mantenerlo durante 60 segundos. Lavar el portaobjetos con agua.

  3. Aplicar alcohol etílico 95% sobre el portaobjetos y mantenerlo de 5 a 10 segundos. Lavar el portaobjetos con agua.

  4. Por último, aplicar safranina en el portaobjetos y mantenerla durante 45 segundos. Lavar el portaobjetos con agua.

Cuatro etapas del experimento de tinción de Gram. En la primera etapa, se vierte el contenido del frasco con una sustancia de color morado, llamada violeta de cristal, sobre el portaobjetos y se deja allí durante 60 segundos. Como resultado, las estructuras esféricas y en forma de bastón dentro del círculo, que representan la vista microscópica de las bacterias en el portaobjetos, se colorean de morado. En la segunda etapa, el contenido del frasco con una sustancia naranja, llamada yodo, se vierte sobre el portaobjetos y se deja allí durante 60 segundos. Como resultado, las bacterias bajo la vista microscópica permanecen de color morado. En la tercera etapa, se vierte el contenido de la botella con una sustancia de color azul claro, llamada alcohol etílico 95%, sobre el portaobjetos y se deja allí de 5 a 10 segundos. Como resultado, las bacterias con forma de bastón que se ven al microscopio se decoloran, y las esféricas permanecen de color morado. En la última etapa, se vierte el contenido del frasco con una sustancia rosa, llamada safranina, sobre el portaobjetos y se deja allí durante 45 segundos. Como resultado, las bacterias con forma de bastón que se observan al microscopio se colorean de rosa y las esféricas permanecen de color morado. Las bacterias con forma de bastón se denominan gram negativas y las moradas gram positivas.

Figura 1: Flujo de trabajo del método de tinción de Gram.