Tripsina

La tripsina es una proteasa de serina que se encuentra en el sistema digestivo de muchos vertebrados, donde hidroliza proteínas. Rompe las cadenas peptídicas principalmente en el extremo carboxilo de los aminoácidos lisina o arginina, excepto cuando a alguno de ellos les sigue la prolina. En los cultivos celulares, la tripsina se usa para romper las adhesiones focales que anclan la placa de cultivo celular, así como la adhesión célula-célula por mediación de la cadherina, para poder cultivar células individuales. El mecanismo de acción de la tripsina es inhibido por las proteínas en suero, el calcio y el magnesio; en presencia de calcio, las cadherinas son resistentes a la tripsina. Por tanto, la mayoría de las soluciones de tripsina contienen también EDTA, que actúa como agente quelante del calcio. Además, debemos lavar nuestras células primero utilizando PBS libre de calcio y de magnesio. Finalmente, es importante incubar las células con tripsina no más de 2 a 5 minutos, puesto que la tripsina puede ser tóxica para las células tras ese periodo.

Normalmente, la solución de tripsina es de origen animal y debe almacenarse a -20 °C y precalentarse a 37 °C antes de su uso.