Paso de transferencia del Western blot

En el paso de transferencia del Western blot, se transfieren las proteínas del gel a una membrana. Esta membrana suele estar hecha de nitrocelulosa o fluoruro de polivinilideno (PVDF). En comparación con el PVDF, la nitrocelulosa es más adecuada para proteínas de bajo peso molecular, menos susceptible de experimentar señales de fondo (pero también menos sensible) y menos adecuada para la eliminación de los anticuerpos y el añadido posterior de otros diferentes.

Al igual que en la electroforesis en gel de proteínas, las proteínas se mueven del cátodo al ánodo. En el procedimiento tradicional del Western blot, se apilan el gel y la membrana, y se colocan en un tanque lleno de solución tampón. El gel y la membrana están protegidos por papel de filtro y esponjas, y se mantienen juntos gracias a un casete. Puesto que los iones de la solución tampón conducen la electricidad, todos los componentes de esta pila han de estar bien empapados en solución tampón. El gel y la membrana han de mantenerse bien pegados el uno al otro, sin burbujas de aire entre ellos. Para evitar el sobrecalentamiento, se añade un acumulador de frío al tanque. El casete suele tener un código de colores para que el usuario pueda asegurarse de que el gel está mirando hacia el cátodo y la membrana hacia el ánodo. Para obtener más información acerca de los posibles problemas, consulta la resolución de problemas del Western blot.

Existen otros sistemas de Western blot que tienen un aspecto ligeramente distinto al de esta simulación, pero todos están basados en los mismos principios.