Le blocage

Un agent bloquant est utilisé après l'étape de revêtement. Cet agent est une protéine sans importance qui n'interfère pas avec l'expérience. Il recouvre tous les sites de liaison de surface insaturés dans les puits de la microplaque, empêchant ainsi la liaison non spécifique des protéines à la microplaque lors des étapes ultérieures du test. La liaison non spécifique peut entraîner des faux positifs. Un tampon bloquant optimal maximise le rapport signal/bruit et il est important qu'il n'interagisse pas avec les anticorps ou la molécule cible.

L'agent bloquant peut être une protéine ou un détergent (ou un bouillon de culture). Les agents bloquants courants sont le Tween 20 (un détergent non ionique), le lait écrémé en poudre, la gélatine et l'albumine de sérum bovin (ASB).