Le passage des cellules
Les cultures adhérentes doivent faire l'objet d'un passage lorsqu'elles sont en phase logarithmique avant d'atteindre la confluence, autrement, il leur faut plus de temps pour se renouveler lorsqu'elles seront réensemencées. En principe, vous pouvez le détecter à vue d'œil en vous basant sur l'espace libre entre les cellules pour estimer le niveau de la confluence. En règle générale, le passage des cellules se situe entre 70 et 90 % de confluence. Le passage des cellules doit également s'effectuer selon un calendrier prédéfini afin de garantir un comportement reproductible qui vous permettra de contrôler leur condition générale. Des anomalies par rapport aux paramètres de croissance indiquent généralement que la culture n'est pas saine ou qu'un composant de votre système de culture ne fonctionne pas correctement. Il est donc fortement recommandé de consigner dans un journal les détails de la croissance des cellules.
Les techniques de dissociation
La première étape de la sous-culture des cellules adhérentes consiste à les dissocier de la surface du récipient de culture. On peut avoir recours pour cela à des procédures enzymatiques ou mécaniques, comme le montre le tableau ci-dessous.
Procédure | Agent de dissociation |
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Secouer | Secouer ou agiter le récipient de culture ou pipeter vigoureusement. |
Gratter | Grattoir à cellules |
Dissocier à l'aide d'enzymes | Trypsine, trypsine + collagénase, dispase |